что такое антиглобулиновая сыворотка
Что такое антиглобулиновая сыворотка
Принцип антиглобулинового теста Кумбса. Антиэритроцитные антитела неполного типа и молекулы комплемента (С), находящиеся на поверхности эритроцитов выявимы — прямой тест — их агглютинацией в контакте с животной сывороткой, содержащей антитела на человеческий антиглобулин (антиглобулиновая сыворотка). Свободные в сыворотке неполные антитела выявляются — косвенный тест — их закреплением на смеси нормальных эритроцитов группы 0, все антигены которых принадлежат известной резус-системе, далее агглютинируемые под воздействием антиглобулиновой сыворотки.
Материалы, реагенты антиглобулинового теста Кумбса: пробирки на 10/100 мл; градуированные пипетки на 1, 2 мл; пастеровские пипетки; штативы; предметные нешлифованные стекла; 8,5‰ раствор NaCl; эритроциты. Эритроциты больного, равно как и принадлежащие к группе 0 получим из свежеотобранной крови на противосвертывающем веществе (раствор ЭДТА).
Эритроциты группы 0 отобрать с таким расчетом, чтобы они исходили от лиц в норме и содержали все антигены резус-системы. Их можно сохранять до 7 дней в аутологической плазме, при температуре + 4°С. В случае отсутствия эритроцитов группы 0, известной антигенной мозаики, можно использовать смесь эритроцитов группы 0, резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.
Сыворотка больного должна быть свежеотобранной.
Техника антиглобулинового теста Кумбса:
а) Прямой тест Кумбса: эритроциты больного промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl.
На несколько предметных стекол нанести по крупной капле из разведений антиглобулиновой сыворотки, а рядом — по маленькой капле из осадка эритроцитов больного; перемешать капли углом стекла. Приготовленный материал оставить на столе 5 мин., затем исследовать на наличие агглютинатов. В случае положительного результата определить максимальный агглютинирующий титр.
б) Косвенный тест Кумбса: эритроциты группы 0, резусположительные и резус-отрицательные промыть 3 раза 8,5‰ раствором NaCl и подвергнуть воздействию сыворотки больного из расчета 2 капли эритроцитов на 8—10 капель сыворотки, затем, в течение 60 мин., провести инкубацию при температуре 37°С. После этого снова трижды промыть эритроциты и воздействовать на них антиглобулиновой сывороткой, по указаниям для прямого теста Кумбса.
Когда речь идет о холодовых активных антителах сенсибилизацию эритроцитов группы 0 провести 60 мин. при температуре + 4°С.
Примечание: 1) Не проводить прямой тест Кумбса на эритроцитах, сохраненных один или несколько дней при температуре + 4°С или комнатной температуре, поскольку результаты могут оказаться ложноположительными за счет фиксации имеющихся в нормальной сыворотке непол ных, активных на холоде антител. 2) В случаях выраженной гиперпротеинемии промывать эритроциты 4—5 раз и проверить отсутствие сывороточных белков в последней промывной жидкости, с помощью сулфосалициловой кислоты.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Что такое антиглобулиновая сыворотка
Кровь представляет из себя жидкую ткань, которая состоит из тромбоцитов, эритроцитов, лейкоцитов и плазмы. Кровь играет важнейшую роль в функционировании человеческого организма, исполняя важные жизненные функции, и нередко применяется в медицинских целях. Допустим, во время значительный потери крови возникает потребность в трансфузии крови от донора реципиенту.
Выявление группы крови перед началом трансфузии
Сегоднятипирование крови осуществляется по антигенам эритроцитов, этому способствуют современные изосерологические исследования. Для этого обязательно делаются анализы на определение группы крови и резус-фактора по системе АВ0 и анализы на выявление совместимости крови реципиента и донора и иные анализы, в частности реакция Кумбса.
Для уменьшения риска для жизни больного проводят типирование крови, поскольку даже с одинаковыми группами крови, рецепиент и донор могут не совпадать по другим параметрам. После определения группы крови и резус-фактора, проводят анализ на совместимость – рецепиент и донор являются совместимыми, если в ходе анализа не случается агглютинации (склеивания эритроцитов) либо же гемолиза (разрушения эритроцитов).
Свести к минимуму угрозу для жизни больного позволяет как раз типирование крови. Перед трансфузией, помимо основных анализов, к примеру определение группы крови и резус-фактора, проводят много иных лабораторных исследований. Определение группы крови выступает важным анализом, который производится перед каждым хирургическим вмешательством, во время беременности, у новорожденных детей.
Реакция Кумбса
Для выявления гемолитической болезни у новорожденных детей и определения антител к резус-фактору у беременных женщин производится реакция Кумбса. Данный тест имеет огромное значение, так как резус-несовместимость матери и ребенка может способствовать гемолитической болезни ребёнка.
Непрямая и прямая реакция Кумбса
Тест Кумбса бывает прямой и непрямой, он протекает в один либо два этапа. В ходе проведения прямой реакции Кумбса антиглобулиновая сыворотка добавляется к сыворотке крови, с условием, что антитела зафиксировались на эритроцитах, и происходит агглютинация эритроцитов.
Если антитела находятся свободно в плазме крови проводится непрямой тест Кумбса. Для начала эритроциты и сыворотку крови инкубируют, чтобы закрепить антитела на эритроцитах. Затем добавляется антиглобулиновая сыворотка.
Антиглобулиновая сыворотка
Антиглобулиновую сыворотку используют для проведения реакции Кумбса – это реагент, имеющий антитела к иммуноглобулинам человека. Антиглобулиновая сыворотка еще используется в генетике, акушерстве, судебной медицине и других медицинских областях.
Что такое антиглобулиновая сыворотка
Антиглобулиновый тест, который проводится для выявления антител, прикрепившихся к поверхности эритроцитов. Используется для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии. С его помощью определяется наличие на мембранах эритроцитов IgG, которые могут активировать систему комплемента.
Кумбс-профиль, реакция Кумбса, антиглобулиновый тест.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Под гемолитической анемией понимают заболевание, которое характеризуется внутриклеточным и внутрисосудистым разрушением эритроцитов. При аутоиммунных гемолитических анемиях образуются антитела к собственным антигенам эритроцитов. Гемолитическая анемия может быть вызвана рядом причин: использованием токсических средств и лекарственных препаратов, иммунной патологией, инфекциями, групповой несовместимостью при переливании крови и пр. При этом нарушено взаимодействие внутри иммунной системы, что приводит к восприятию организмом собственных эритроцитов как чужих. В лимфоузлах синтезируются антитела класса IgG и/или IgM, которые, присоединяясь к поверхности эритроцита, запускают ряд ферментов (систему комплемента) и повреждают стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу. Первые симптомы обусловлены и разрушением эритроцитов, и уменьшением гемоглобина: усталость, слабость, раздражительность, одышка, боль в животе и груди, тошнота, темный цвет мочи, боли в спине, желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек, увеличение печени, селезенки, снижение количества эритроцитов и гемоглобина в общем анализе крови.
Для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии используется проба Кумбса. С помощью этого метода определяется наличие на мембранах эритроцитов, которые могут активировать систему комплемента. Тест направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору – специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешивании крови плода и беременной, при гемотрансфузиях, проведенных без предварительного типирования крови. Положительный результат пробы Кумбса подтверждает диагноз «аутоиммунная гемолитическая анемия», доказывая ее аутоиммунное происхождение. При этом отрицательный результат не позволяет снять диагноз.
Для чего используется исследование?
Когда назначается исследование?
Непрямая реакция Кумбса
Опубликовано 30 июня 2018 пользователем Imarketer
Горизонтальные табы
Непрямая проба Кумбса или непрямой антиглобулиновый тест (НАТ) необходим для определения антител к эритроцитам, содержащимся в сыворотке крови.
До настоящего времени проба Кумбса широко применяется в лабораторной практике для диагностики иммунопатологических состояний, в частности при аутоиммунных гемолитических анемиях, характеризующихся деструкцией эритроцитов вследствие связывания клеточной мембраны с антителами и (или) компонентами системы комплемента. С его помощью выявляют присутствие на эритроцитарной мембране IgG (обычно IgG1 и IgG3), которые могут активировать комплемент, а иногда и комплемента (С3d). Однако в остром периоде заболевания в связи с разрушением эритроцитов, на которых фиксировалось большое количество антител, при гемолитическом кризе, а также при недостаточном количестве антител при хроническом течении болезни может отмечаться отрицательная прямая проба Кумбса.
Непрямая проба Кумбса остается наилучшим методом индивидуального подбора трансфузионных сред, так как позволяет наиболее точно установить индивидуальную совместимость донора и реципиента по эритроцитарным антигенам.
Дополнительное выполнение прямого антиглобулинового теста на наличие аутоантител рекомендуется при обследовании всех реципиентов органов и тканей в предтрансплантационном периоде и реципиентов гемопоэтических стволовых клеток также и после трансплантации. Кроме иммуногематологии и трансфузиологии антиглобулиновые пробы широко применяются при диагностике целого ряда патологических состояний: при гематологических заболеваниях, включая лимфопролиферативные, при системных заболеваниях соединительной ткани, болезни Шегрена, хроническом активном гепатите и др.
Активно используются пробы Кумбса в медицинской генетике и судебной медицине для определения поверхностных эритроцитарных антигенов.
– для более точного установления резус-принадлежности (антиген D) при нечетких результатах определения резус-фактора другими методами (полиглюкиновый, желатиновый и др.);
– для выявления слабых эритроцитарных антигенов (системы Келл, Даффи, Кидд, Льюис и др.) и антител к этим антигенам;
– для обнаружения и идентификации аллоиммунных антиэритроцитарных антител, включая антитела, вызывающие гемолитические посттрансфузионные реакции;
– для определения наличия иммунных антител системы АВ0 при трансфузионных гемолитических осложнениях;
– в качестве пробы на совместимость при индивидуальном подборе переливаемой крови и ее компонентов.
Интерпртация
В норме реакция Кумбса отрицательная.
Положительный непрямой антиглобулиновый тест при отрицательной прямой пробе обычно указывает на присутствие в исследуемой сыворотке аллоантител в свободном состоянии, связанное с предшествующими переливаниями крови или беременностями.
Проба Кумбса часто бывает положительной при обострении пароксизмальной ночной гемоглобинурии; позитивная проба Кумбса с анти-С3 и анти-С3dg является маркером холодовой агглютининовой болезни.
Положительные результаты прямого и непрямого антиглобулиновых тестов не являются абсолютным доказательством наличия антител, поскольку положительные реакции могут наблюдаться и при различных патологических состояниях, не связанных с изосенсибилизацией или аутосенсибилизацией организма.
Поэтому только сопоставление результатов нескольких иммуносерологических методов с клинической картиной заболевания позволяет в полной мере судить о развивающемся патологическом процессе.
Непрямая проба Кумбса
Описание
Непрямая проба Кумбса — непрямой антиглобулиновый тест. Он позволяет выявить атипичные антитела в плазме больных, в том числе аллоантитела, к чужим антигенам эритроцитов. Исследование выполняется когда прямая проба Кумбса оказалась отрицательной и антитела не были обнаружены.
Непрямой антиглобулиновый тест определяет анти-D, анти-С, анти-Е, анти-с и анти-е антитела к антигенам эритроцитов в плазме.
Исследование протекает в 2 этапа, поэтому и имеет название «непрямая проба».
На пером этапе антитела в сыворотке больного, которые не связаны с эритроцитами, фиксируют на эритроцитах здорового человека. Вторым этапом отмытые эритроциты донора группы 0(I) инкубируют с исследуемой сывороткой. Если в сыворотке присутствуют антитела, то они связываются с эритроцитами. Далее эти эритроциты обрабатывают антиглобулиновой сывороткой, которая содержит антитела против антител, т.е. фактически проводят прямую реакцию Кумбса. При появлении агглютинации проба расценивается как положительная непрямая проба Кумбса.
Положительный результат непрямой пробы Кумбса свидетельствует о возможных трудностях при подборе крови для переливания и проведении перекрёстной пробы на совместимость с консервированной кровью.
Накануне сдачи исследования нужно избегать физических нагрузок и стрессовых состояний.
Препараты, которые могут повлиять на результат пробы:
хинидин, метилдофа, цефалоспорины, сульфаниламиды, хлорпромазин, дифенилгидантоин, этосуксимид, гидралазин, леводопа, мефенаминовая кислота, мелфалан, пенициллин, прокаинамид, рифампин, стрептомицин, тетрациклины, изониазид.
Интерпретация результатов
В норме непрямая проба Кумбса отрицательная, что свидетельствует об отсутствии на поверхности эритроцитов антител и комплемента.