что значит эмбрион 5аа
Качество эмбрионов при ЭКО
Качество эмбрионов – это ключевой параметр, определяющий успешное прохождение ЭКО. Определение качества производится специалистами-эмбриологами при помощи визуального исследования под микроскопом.
В настоящее время приняты четыре класса качества эмбрионов на стадии дробления (по 3 дня развития)
Данные критерии являются достаточно условными. При определении качества исследуется набор параметров – количество клеток, их расположение, фрагментация, толщина оболочки.
Качество эмбрионов при ЭКО определяется через 48 часов после оплодотворения яйцеклетки. К тому времени должно сформироваться минимум две клетки (оптимально четыре). Через 72 часа клеток должно быть минимум шесть (оптимально восемь). Чем выше качество, тем выше у эмбриона шансы на выживание.
Считается, что эмбрионы отличного и высокого качества имеют высокую вероятность успешной имплантации. При этом необходимо отметить, что существует целый ряд параметров, не поддающихся лабораторным измерениям и существенно влияющих на способность эмбрионов к имплантации.
В клинике «Дети из пробирки» качество эмбрионов определяют специалисты-эмбриологи высшей квалификации. Правильный выбор эмбриона означает максимальную вероятность беременности.
Вся информация носит ознакомительный характер. Если у вас возникли проблемы со здоровьем, то необходима консультация специалиста.
Оценка качества яйцеклеток и эмбрионов при ЭКО
Качество яйцеклеток и качество эмбрионов при ЭКО играет очень важную роль, значительно влияя на успешность применения этой репродуктивной технологии.
От качества взятых женских и мужских половых клеток и от того, как произошло оплодотворение, во многом зависит, будет ли попытка ЭКО неудачной или же наступит долгожданная беременность, которая приведет к рождению здорового ребенка. Поэтому технология экстракорпорального оплодотворения предусматривает оценку качества эмбрионов и яйцеклеток.
Как же определить качество яйцеклетки, и как проводится оценка качества эмбрионов?
Оценка качества яйцеклетки
Для успешного оплодотворения нужны зрелые яйцеклетки, которые будут способны взаимодействовать со сперматозоидом. Как правило, у молодых женщин достаточно хорошее качество ооцитов. Однако после 35 лет оно заметно ухудшается. Специальная гормональная стимуляция, проводящаяся перед забором яйцеклеток, позволяет ускорить их созревание. Однако даже после стимуляции ооциты могут оставаться недостаточно зрелыми и качественными.
Как проверить качество яйцеклетки?
Оценка ооцита проводится сразу после их забора из яичников женщины. При этом проверка качества яйцеклетки представляет собой визуальное наблюдение, которое осуществляется с помощью бинокулярного микроскопа.
Качество ооцитов определяется по внешнему виду цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. При хорошем качестве — цитоплазма должна быть однородной, одного цвета и с отсутствием гранул. О плохом качестве яйцеклетки говорит присутствие вакуолей, темная окраска, гранулы, деформации.
Проверка качества яйцеклетки позволяет провести отбраковку наиболее некачественных экземпляров и тем самым выбрать наиболее подходящий для процедуры ЭКО генетический материал. Зрелый ооцит обозначают аббревиатурой MII.
Кроме того необходимо проверить качество спермы мужчины и на основе полученных результатов определить способ оплодотворения с применением технологии ЭКО или ИКСИ. Оба репродуктивных метода представляет собой оплодотворение «в пробирке», но в первом случае сперматозоиды должны самостоятельно оплодотворять яйцеклетки, а во втором — сперматозоид искусственно вводится в яйцеклетку.
Проверка качества эмбрионов в первые дни после оплодотворения
Качество эмбрионов впервые определяют через 18-20 часов после процедуры оплодотворения. В это время эмбриолог может сделать выводы, произошло ли нормальное оплодотворение, и образовалась ли зигота. Он определяет, присутствуют ли 2 пронуклеуса, оценивает их качество, симметричность, внешний вид.
На вторые сутки происходит дробление зиготы — появляются дочерние клетки — бластомеры. Качество бластомеров на этом этапе определяется по размерам, форме, также определяется степень фрагментации.
Если внутри эмбриона много бластомеров и низкая степень фрагментации (объем безъядерных элементов цитолазмы), то эмбрион считается качественным.
В эмбрионологии используется специальная классификация качества эмбрионов:
Также в этой классификации присутствуют цифры, указывающие на количество бластомеров. Чем больше цифра, тем лучше эмбрион.
На третий день в эмбрионе уже от 7 до 9 бластомеров. В этот период могут возникать «генетические поломки», приводящие к остановке развития эмбриона.
На четвертый день в зародыше уже присутствует 10-16 бластомеров.
На пятый день эмбрион переходит в стадию бластоциста.
Качество эмбрионов на стадии бластоцисты
На стадии бластоцисты у эмбриона уже появляется полость, которая достигает 50% от общего объема, и есть два типа клеток, которые образуют наружный и внутренний слои. Качество бластоцист определить очень важно, потому что именно на этой стадии происходит подсадка эмбриона в полость матки женщины.
На этой стадии эмбрион окружен оболочкой. После перемещения в матку эта оболочка разрывается и у бластоцисты появляется возможность прикрепиться к стенке матки.
Качество бластоцист определяется несколькими критериями: размер внутренней полости и степень проникновения эмбриона за оболочку, количество клеток и их плотность, состояние наружного слоя.
Размер внутренней полости определяет степень зрелости бластоцисты:
1 — если полость внутри эмбриона менее 50% от его объема (ранняя бластоциста);
2 — полость внутри эмбриона больше 50%;
3 — полость занимает весь объем эмбриона;
4 — полость увеличивается, а оболочка эмбриона становится тоньше;
5 — наружный слой бластоцисты проникает сквозь блестящую оболочку;
6 — бластоциста покидает оболочку.
Количество клеток и их плотность:
А — много плотно расположенных клеток.
В — среднее количество клеток внутри бластоцисты.
С — клеток внутри бластоцисты мало.
Состояние наружного слоя:
А — много клеток;
В — среднее количество клеток.
С — мало клеток.
Согласно этой классификации качество эмбрионов 4АА будет лучше, чем качество эмбрионов 2ВВ.
Бластоцисты 3АА, 4АА, 5АА, 6АА относят к эмбрионам хорошего качества. Бластоцисты 1АВ, 2ВВ и т.д. — среднего качества. Бластоцисты, в аббревиатуре которых есть «С» — плохое качество.
Чем выше будет качество эмбрионов при подсадке в матку, тем больше шансов будет, что процедура ЭКО окажется успешной.
Обычно во время процедуры выбирается 1 или 2 наивысшего качества эмбриона при подсадке в матку. Если было получено больше качественных эмбрионов, то «лишние» экземпляры замораживаются. Они могут быть использованы позже, если данный перенос не завершиться беременностью. При замораживании эмбрионов используется специальный метод быстрой заморозки, что позволяет сохранить их жизнеспособность.
Оценка качества эмбрионов
Центральным звеном клиники ЭКО является эмбриологическая лаборатория. Для каждой попытки ЭКО заводится «Эмбриологический протокол», в котором отражается судьба каждого эмбриона от момента получения ооцитов и до момента переноса или замораживания.
Сразу после получения ооцитов и сперматозоидов производится их морфологическая оценка. По результатам анализа эякулята (спермограмме) принимают решение о способе оплодотворения – ЭКО или ИКСИ.
Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.
В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.
Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).
Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.
Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов. А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.
Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).
2-й день (4А) 3-й день (8А) 4-й день (comp)
Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.
Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).
К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.
На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.
Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.
Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.
Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.
Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.
В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.
Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)
Скидка 50% на первичный прием репродуктолога
Заполнив анкету для будущих родителей, вы сэкономите время врача на первичном приеме, поэтому он будет для вас стоить 50% от обычной цены.
Развитие эмбрионов
1 день. Оценка оплодотворения.
Спустя 16-18 часов после инсеминации (слияния полученных ооцитов и спермы) производится первая оценка оплодотворения. К этому времени эмбриолог видит сформировавшиеся пронуклеусы. На данном этапе происходит первая селекция – неоплодотворенные ооциты и аномальные зиготы изолируются от нормальных зигот.
Рис.1 Оплодотворенные яйцеклетки (пронуклеусы) – видны по два клеточных ядра.
2 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 48 часов после получения ооцитов эмбриолог оценивает дробление эмбрионов, их морфологию (строение). Под морфологической оценкой понимают количество бластомеров (клеток) и аномалии цитоплазмы и ядра.
Идеальный эмбрион на 2 день должен иметь 4 равных по размеру одноядерных бластомеры без фрагментации.
Рис.2 Слева на картинке идеально сформированный эмбрион, состоящий из 4 бластомеров. Справа – строение нарушено, дальнейшее развитие прекратилось.
3 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 72 часа после получения ооцитов производится оценка эмбрионов по следующим параметрам:
Количество бластомеров (клеток)- указывается цифра. В норме – 6-8 клеток.
На 3 день эмбриолог и лечащий врач могут принимать решение о сроке переноса эмбрионов. При переносе эмбрионов на 5 – день, на 3-й день все качественные эмбрионы переносятся в другую среду для культивирования до стадии бластоцисты.
Рис.3 Слева эмбрион отличного качества – оценка 8; Эмбрион по центру имеет небольшую фрагментацию – оценка 6 Sl Fr; Справа эмбрион сильно фрагментирован, подсчет бластомеров затруднен.
4 день. Дальнейшее культивирование эмбрионов.
К 4 дню процесс компактизации должен быть завершен, и эмбрион достигает стадии морулы.
Рис 4. Две отлично сформированные морулы.
5 день. Культивирование эмбрионов и перенос.
К этому времени эмбрион должен развиться до стадии бластоцисты. На основании морфологических признаков делается оценка возможности бластоцисты к дальнейшему развитию и принимается решение о ее пригодности к переносу в полость матки или витрификации (заморозке). Бластоцисты имеют цифровую и буквенную оценки.
Оценка степени развития бластоцисты и статуса хэтчинга (вылупления из оболочки):
1 – ранняя бластоциста: бластоцель меньше половины объема эмбриона (eBl);
2- бластоциста: бластоцель больше половины объема эмбриона (Bl 2);
3- полная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион (Bl 3)$
4- экпандированная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион, истончение зоны внешней оболочки (Bl 4 и Bl 5)
5- вылупляющаяся бластоциста: трофэктодерма начинает выступать их зоны вншней оболочки (Bl 5);
Оценка внутренне клеточной массы:
А – много плотно упакованных клеток;
B – несколько свободно сгруппированных клеток;
C – мало клеток, клетки плохо сгруппированы.
Оценка трофэктодермы:
А – много клеток, формирующих связанный эпителий;
В — несколько клеток, формирующих свободный эпителий;
C — несколько клеток серповидной формы.
Таким образом, эмбрион получает тройную оценку: BL 5АА
Под микроскопом эмбриолога. Эмбриологический этап в процедуре ЭКО.
Кто такой эмбриолог
Знакомьтесь – эмбриологи. Редкие и уникальные кадры, биологи по образованию. Именно они работают над тем, чтобы «чудо» случилось – оплодотворение и зарождение эмбрионов. Это они оценивают качество эмбрионов и принимают решение: из какого эмбриона получится ваш малыш. Это высококвалифицированные специалисты, которые не только работают день и ночь, но и постоянно учатся, перенимая новые тенденции в науке.
Как развивается эмбрион
В первый день после пункции яйцеклетка превращается в зиготу. Возможно, многие помнят этот термин из школьной биологии. На этом этапе мы видим двойной набор хромосом – 23 хромосомы женщины и 23 хромосомы мужчины. Если образовались два шарика – пронуклеусы – значит, оплодотворение прошло хорошо.
После этого, ночью, происходит первое дробление клетки. Второе, утреннее дробление эмбриологи начинают активно наблюдать. На этот момент они уже видят четырехклеточный эмбрион. На третьи сутки – восьмиклеточный эмбрион. Все эти дни с эмбриона не сводят глаз. Ведь его поведение учитывается при оценке.
На четвертые сутки 10-16 клеток эмбриона сливаются воедино, образовалась морула. И вот, наконец-то, пятый день – бластоциста. Эмбрион, который готов к переносу. Ведь на пятый день он уже имеет сложную структуру, состоящую из 128 клеток. На этой стадии эмбрион обладает наибольшей способностью к имплантации, так как уже преодолел препятствия, возникающие на разных стадиях дробления.
Три или пять дней?
Мы культивируем эмбрионы пять дней. Это очень дорогое удовольствие: гигантская нагрузка на эмбриологическую службу, постоянная смена дорогостоящих сред. Задействовано много инкубаторов. Ведь моделируется маточная труба, она вырабатывает различные вещества, которые эмбриологи заменяют специальными средами.
Если в результате стимуляции у нас получилось много яйцеклеток, то эмбрион будет всегда переноситься на пятые сутки. Эмбриологи дают развиться эмбрионам, чтобы выбрать самого сильного. Ведь если эмбрион дожил до 5 дней в искусственной среде, вероятность того что он приживется в матке возрастает.
В тех случаях, когда было получено не много клеток, и созревает только один эмбрион – может быть принято решение о переносе на третий день. Так специалисты дают возможность эмбриону дозреть в матке, пытаясь всеми силами увеличить шансы на беременность.
Предпочтение отдается все-таки переносу на пятый день, потому что на пятый день остаются самые жизнеспособные эмбрионы. Слабые эмбрионы погибают между третьим и пятым днем.
Пять дней – это целая жизнь для эмбрионов, за этот период они постоянно меняются. На третий день он может казаться качественным, а к пятому дню все может кардинально измениться.
Благодаря системе, которая позволяет культивировать эмбрионы пять дней, в случае, если эмбрионы дожили до этого дня – у нас есть гарантии того, что это жизнеспособные эмбрионы.
Самое интересное. Как происходит отбор
Итак, как вы знаете, каждому эмбриону дают оценку. Существует несколько признанных классификаций эмбрионов. В Клинике Нуриевых используется классификация по Гарднеру. Что это такое? Например, возьмем самый лучший эмбрион. Эмбриологи шутливо называют такой эмбрион «отличник» – 5АА. Первая буква показывает качество внутриклеточной массы (ВКМ) – внутренний слой эмбриона, который дает начало плоду. Чем больше внутренняя масса, тем вероятнее – это А, если мельче – B, совсем мало – С.
Вторая буква – оценка внешнего слоя эмбриона – трофобласта. Цифра постоянно меняется, так как эмбрион растет. Цифру можно не писать, она не существенна при оценке.
Получились разные эмбрионы, всем присвоили разные буквы и цифры. Как же эмбриолог будет выбирать? 5АА – базовая система оценки, но она не дает полной информации для выбора эмбрионов.
«Репутация» эмбрионов
Иногда из двух эмбрионов с разными характеристиками, например, 5АА и 5АB, эмбриолог выбирает для пересадки второй эмбрион, с «неидеальными», казалось бы, показателями. Только на первый взгляд показатели «неидеальны», потому что не только качество двух оболочек определяет жизнеспособность эмбриона. Еще один важный критерий – репутация эмбриона. В нашем примере у эмбриона 5АВ она оказалась лучшей.
Репутация эмбриона складывается из множества факторов, полученных в процессе наблюдения за их «поведением» с 1 по 5 день жизни. Учитывается все: какой эмбрион развивался лучше, какой быстрее дробился, как вел себя на каждом этапе – все это в итоге влияет на судьбу эмбриона.
В любом случае, пациенту могут перенести эмбрионы любого класса. Да, эмбрион с показателями АС слабее, чем АА, но у каждого эмбриона, который дожил до пятого дня, всегда есть шанс на дальнейшую жизнь, и из каждого эмбриона может получиться ребенок. Эти показатели лишь первая видимая, но не единственная его характеристика. Окончательную верную оценку эмбриону может дать только специалист эмбриологической лабораторий. Поэтому делать преждевременные выводы, узнавая показатели своих эмбрионов, ни в коем случае нельзя.
Также надо отметить, что качество эмбриона не имеет прямой связи с шансами и исходами беременности. Каждый случай индивидуален.
Заморозка эмбрионов
В первом стимулированном протоколе мы выбираем самые лучшие эмбрионы и переносим их, – остальные эмбрионы замораживаются. Это позволит Вам получить следующую беременность с меньшими финансовыми затратами и без стимуляции в криопротоколе. Еще несколько лет назад после заморозки и разморозки исходы были хуже, чем в свежих протоколах. Сегодня доказано: свежие и замороженные эмбрионы, имеют абсолютно одинаковые шансы. Наука движется вперед и современные среды для заморозки идеальны, и обеспечивают выживаемость эмбрионов свыше 90 процентов.
В нашей Клинике заморозке подлежат только те эмбрионы, которые смогут ее пережить, и соответственно, дать начало беременности уже после разморозки.
У эмбриологов есть четкая сложная инструкция, по которой происходит отбор эмбрионов для заморозки. На решение влияет множество факторов: качество бластоцисты, репутация эмбриона, какой у женщины по счету протокол, какой диагноз и т.д. Принять правильное решение, о том, какой эмбрион замораживать может только эмбриолог.
Как замораживаются эмбрионы? Только методом витрификации. Витрификация – мгновенный способ заморозки, с добавлением специальных растворов – криопротекторов, которые исключают образование кристаллов льда, повреждающих клетки. Механические повреждения сводятся к нулю. Благодаря этому выживаемость эмбрионов составляет более 90 процентов. В нашей Клинике этот метод начал применятся с самой первой заморозки и используется по сегодняшний день.
Вы – наш пациент, и мы заботимся о Вас. И мы знаем, как непросто проходить через протокол ЭКО.
Все те пять дней, которые требуются эмбриону для полноценного развития, Вам хочется знать, что с ним происходит. Мы написали эту статью, чтобы объяснить вам суть этого сложного этапа.
В эмбриологической лаборатории нашей Клиники созданы идеальные условия для культивирования и хранения эмбрионов. Доверьтесь своему врачу и эмбриологам, они помогут вам найти оптимальный вариант.
Помните, что над вашим протоколом ЭКО трудится не только врач, а вся команда Клиники Нуриевых, которая каждый день думает над тем, как сделать ваше лечение комфортным и эффективным. Постарайтесь провести эти дни в приятных эмоциях и просто отдохнуть. Тогда, все вместе, мы обязательно добьемся успеха.